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凝聚胺法交叉配血標準操作規程

2015-12-08 10:24:04 來源:實驗室資訊網 瀏覽:

    1. 原理

    凝聚胺(polymatching)法首先利用低離子介質降低溶液的離子強度,減少紅細胞周圍的陽離子云,促進血清(漿)中的抗體與紅細胞相應抗原結合,再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液,中和紅細胞表面的負電荷,縮短細胞間距,形成可逆的非特異性聚集,并使IgG型抗體直接凝集紅細胞。加入中和液后,僅由凝聚胺引起的非特異性聚集,會因電荷中和而分散,而由抗體介導的特異性凝集則不會分散。

    2. 標本采集:

    2.1 標本種類:抽取靜脈血3-4ml待凝固后分離血清,將細胞配成5%鹽水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細胞懸液。

    2.2 標本要求:抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主張用EDTAK2(mg/dz)抗凝標本應無溶血,切標簽齊全。

    3. 標本儲存:急診標本30分鐘內完成操作,標本應至4℃冰箱保存7天。

    4. 標本運輸:室溫運輸。

    5. 標本拒收標準:細菌污染。溶血標本,標簽不齊全不能作測定。

    6. 試劑:

    6.1 試劑名稱:凝聚胺試劑(polymatching)

    6.2 試劑生產廠家:(臺資)珠海貝索生物技術有限公司。

    6.3 試劑組成:

    試劑1. 低離子介質(LowLonic Medium,LIM).試劑打開使用后,可置室溫貯存,未開封者2-10度貯存,有效期為2年。

    試劑2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).貯存及有效期同上。

    試劑3. 重懸液(ResuspendingSolution).貯存及有效期同上。

    試劑4. 8.5%生理鹽水。

    7. 儀器:

    7.1 血型血清索離心機:XTL-4.7 上海離心機械研究所

    7.2 離心機:上海手術器械廠

    7.3 電熱恒溫水箱:北京長源實驗設備廠

    7.4 顯微鏡:OLYMPUS(日本)

    8. 操作步驟及結果判斷:

    8.1 供受者紅細胞用生理鹽水配成3-5%的細胞懸液。加樣量均為:血清2滴,紅細胞懸液1滴。主管:受血者血清+供者紅細胞懸液;次管:受者紅細胞懸液+供者血清;(陰陽對照管另設)。

    8.2 各管分別加低離子介質0.6ml混勻置室溫1分鐘。加凝聚胺溶液2滴,混勻,置室溫15秒。

    8.3 1000g(3000rpm),離心18秒,棄上清液,管底保留約2滴液體。輕搖

    試管,觀察是否形成凝塊。如未形成凝塊,則重做前面試驗。

    8.4 加入2滴重懸液,輕輕混合,肉眼或顯微鏡下觀察結果。

    8.5 凝塊在1分鐘內分散,試驗結果為陰性,供受者血液配合;反之,如依照為不同強度的凝塊,試驗結果判為陽性,供受者血液不配合。實驗結果必須在3分鐘內判讀。

    9. 操作性能: 快速簡便,特異性強,靈敏度較高,重復性好。

    10. 超出范圍結果處理:

    10.1 細胞自凝: 在冬天氣溫較低時,某些病人血清中含有冷凝集素而導致交叉配血假陽性;遇此現象可用37℃-40℃生理鹽水洗滌紅細胞并置37℃水溶中輕輕搖動,觀察結果。

    10.2 若病人血清(血漿)含有肝素,如洗腎患者能影響配血,須多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

    10.3 紅細胞懸液為5%為宜,過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當,反應不明顯易誤判。

    10.4 各種原因引起的紅細胞溶解,誤判為不凝集,部分溶血時,可溶性血型物質中和了相應的抗體。

    11. 方法局限性:

    11.1 試管,滴管吸頭和玻片必須清潔干燥,防止溶血。

    11.2 操作方法應按規定,先加血清,然后再加紅細胞懸液,以便容易核實是否漏加血清。

    11.3 離心時間不宜過長或過短,速度不宜過快或過慢,以防假陽性或假陰性結果。

    11.4 觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集,繼發性凝固及線狀排列的區別。


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